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預(yù)期用途
PuriMagTM HIC8富集試劑盒（基于磁珠的疏水相互作用色譜法）是為在 MALDI-TOF 質(zhì)譜分析之前基于疏水相互作用從生物樣品中富集蛋白質(zhì)和肽而開(kāi)發(fā)的。
產(chǎn)品信息
PuriMagTM HIC8：10 mg/ml×1ml，存儲(chǔ)于 20%乙醇溶液中。 產(chǎn)品應(yīng)小心儲(chǔ)存和處理，以避免污染。
產(chǎn)品在常溫下運(yùn)輸。我們建議到貨后將試劑盒存放在 2 - 8°C 環(huán)境中。請(qǐng)勿冷凍！
HIC8 緩沖液
Binding buffer (BB): 0.1% trifluoroacetic acid (TFA), NaCl up to 200 mM can be added using HIC8 beads;
Washing buffer (WB): 0.1% trifluoroacetic acid (TFA);
Elution buffer (EB)：Typically 50% ACN in 0.1% TFA.
Note: Fractionation of proteins/peptides is possible by using different concentrations of ACN (e.g. 20%, 50%, 80%)
推薦的生物標(biāo)志物富集程序
通常，我們推薦以下樣品制備方案，但根據(jù)樣品的種類和應(yīng)用，可能需要調(diào)整此方案。為此，可以改變不同的參數(shù)（例如，使用的磁珠量、樣品和結(jié)合溶液的體積）。
注意：在開(kāi)始樣品制備之前，洗脫緩沖液必須每天新配。對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)分析實(shí)驗(yàn)，建議使用50%乙腈。因此，使用穩(wěn)定緩沖液稀釋 100% 乙腈。
注意：使用穩(wěn)定緩沖液可顯著提高靶標(biāo)上樣品制備的穩(wěn)定性及采集的譜圖質(zhì)量。由于其穩(wěn)健性，強(qiáng)烈建議將其用于今后診斷應(yīng)用。但請(qǐng)注意，在乙腈混合物中用穩(wěn)定緩沖液代替去離子水會(huì)略微改變獲得的質(zhì)譜，從而改變與先前研究相比的重現(xiàn)性。為繼續(xù)已經(jīng)開(kāi)始的研究，使用在去離子水中稀釋的50%乙腈。
結(jié)合樣本到磁珠
1. 從上到下小心搖晃（但不要渦旋或旋轉(zhuǎn)！）磁珠至少 20 次，然后反轉(zhuǎn)以獲得均勻的懸浮液。必要時(shí)在移液步驟之間重復(fù)搖動(dòng)。
2. 將10 μL 結(jié)合緩沖液和最多含有 500 pmol 蛋白的 5μL 樣品（例如人血清）轉(zhuǎn)移到標(biāo)準(zhǔn)薄壁 PCR 管中。加入10-20 μL磁珠，上下移液5次，仔細(xì)混合溶液。等待1分鐘。
注意：必須根據(jù)不同的示例進(jìn)行修改（見(jiàn)下文）
10 μL BB
5 μL Sample
10-20 μL Beads
3.將試管放入磁分離架，等待20秒，將珠子與上清液分離。注意磁珠在管中的運(yùn)動(dòng)。
4.使用移液管小心地取出上清液。避免移液器吸頭與磁珠接觸，并注意不要取出磁珠。
5. 將試管從磁分離架移開(kāi)。
洗滌結(jié)合到磁珠上的樣本
6. 洗滌時(shí)，加入 100 μL 洗滌緩沖液。
100 μL WB
7. 將試管放入磁力架，并在相鄰孔之間來(lái)回移動(dòng)試管 20 次。
8. 等待20秒，在管壁上收集磁珠，然后用移液管小心地取出上清液。
9. 重復(fù)步驟 6.-8.兩次。
從磁珠上洗脫樣本
10. 為了洗脫結(jié)合的肽和蛋白質(zhì)，加入 10 μL 洗脫緩沖液（例如，50% 乙腈或 50% 乙腈的穩(wěn)定緩沖液）并充分混合。等待 1 分鐘。
10 μL EB
11. 將試管放入磁力架，等待 30 秒，將磁珠與洗脫緩沖液分離。
12. 將含有純化肽/蛋白的洗脫緩沖液轉(zhuǎn)移到新試管中。
13. 繼續(xù)使用如下所述的適當(dāng)MALDI-TOF靶標(biāo)制備方案或適當(dāng)方法儲(chǔ)存樣品。
應(yīng)用文獻(xiàn)：
1. Mathias Bruegel, Mathis Planert, Sven Baumann, Almut Focke, Florian Then Bergh, Alexander Leichtle, Uta Ceglarek, Joachim Thiery, Georg Martin Fiedler, Standardized peptidome profiling of human cerebrospinal fluid by magnetic bead separation and matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry, Journal of Proteomics, Volume 72, Issue 4, 2009, Pages 608-615, ISSN 1874-3919, https://doi.org/10.1016/j.jprot.2008.11.018. 2. Katrin Sparbier, Thomas Wenzel, Markus Kostrzewa, Exploring the binding profiles of ConA, boronic acid and WGA by MALDI-TOF/TOF MS and magnetic particles, Journal of Chromatography B, Volume 840, Issue 1, 2006, Pages 29-36, https://doi.org/10.1016/j.jchromb.2006.06.028.
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